實驗概要
實驗原理
多聚酶鏈式反應（polymerase chain reaction, PCR）基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性、退火、延伸三個基本反應步驟構成。
1. 模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
2. 模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；
3. 引物的延伸：DNA模板－引物結合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性、退火、延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鐘， 2～3小時就能將待擴增的目的基因擴增放大幾百萬倍。
典型的PCR反應體系由如下組分組成：DNA模板、反應緩沖液、dNTP、MgCl 2 、兩個合成的DNA引物、耐熱 Taq聚合酶。
除了典型的PCR外，人們還根據各種用途設計了各種不同的PCR。如：
RT-PCR，即在mRNA反轉錄之后進行的PCR。
反向PCR，常規PCR允許擴增兩引物之間的DNA區段，而反向PCR則可以對靶DNA區段之外的兩側未知的DNA序列進行擴增。
不對稱PCR，常規PCR使用的引物濃度相同，而不對稱PCR使用的引物濃度不同，兩種引物濃度相差100倍。在最初20各循環中，主要產物是雙鏈DNA。當低濃度引物被耗盡后，高濃度引物引導的PCR就會產生大量單鏈DNA，單鏈DNA可用于序列測定。
主要試劑
1. DNA模板（1ng/μL）（質粒R-pGEX-4T-1，R指代外源基因）
2. 2.5mmol/LdNTP (TaKaRa)
3. 10×PCR緩沖液(TaKaRa)
4. 25mmol/L MgCl 2 (TaKaRa)
5. 引物1、引物2（5pmol/μL）
相關儀器
相關查詢
溫馨提示：尊敬的[]站點管理員，將本頁鏈接加入您的網站友情鏈接，下次可以快速來到這里更新您的站點信息哦！每天更新您的[PCR擴增儀基因擴增原理及方法步驟]站點信息，可以排到首頁最前端的位置，讓更多人看到您站點的信息哦。